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1.造模材料 動物:雌性BALB/c小鼠(H-2基因表型),使用時年齡均為8~10周;試劑與抗體:倉鼠抗小鼠CD3單克隆抗體、異硫氰酸熒光素(fluorescein isothiocyanate, FITC)標記的抗小鼠CD45RB單克隆抗體、藻紅蛋白(phycoerythrin, PE)標記的抗小鼠 CIM單克隆抗體、FITC標記的抗小鼠CD25單克隆抗體和FITC標記的抗小鼠CD69單克隆抗體,RPMI1640培養(yǎng)液、胎牛血清、青霉素、鏈霉素、左旋谷氨酰胺和慶大霉素。>>>商務(wù)洽談,點此處,在線咨詢
2.造模方法
(1)C1345RBhigh CD4+幼稚T細胞的分離:首先使用Dynal磁珠分離健康BALB/c小鼠脾臟內(nèi)的CD4+T細胞,具體操作嚴格按照說明書進行。將FITC標記的CD45RB單抗和 PE標記CD4單抗與CD4+T細胞一起孵育,30min后,使用PBS洗滌2次,以去除未結(jié)合的抗體。然后使用流式細胞儀(FACS Vantage)分離、獲得CD45 RBhigh CD4+幼稚T細胞,經(jīng)分析其純度≥98%。
(2)細胞體內(nèi)移植:調(diào)整CD45RBhigh CD4+幼稚T細胞濃度,按5×100000個/只(200μl PBS液),經(jīng)腹腔或尾靜脈注射到同基因型重度聯(lián)合免疫缺陷病(severe combined immuno- deficiency disease, SCID)小鼠體內(nèi),繼續(xù)飼養(yǎng)。
3.造模原理 CD45RBhigh CD4+幼稚T細胞可誘導SCID小鼠發(fā)生慢性結(jié)腸炎。
4.造模后的一般變化 模型組小鼠3~5(4.1±0.3)周出現(xiàn)體重下降,大便變軟;6~8(7.4±0.6)周出現(xiàn)明顯的慢性結(jié)腸炎癥狀,表現(xiàn)為體重明顯下降、腹瀉、黏液膿血便、脫肛、毛發(fā)直立并失去光澤等。
5.造模后病理及生化變化 模型組小鼠結(jié)腸炎癥性增粗,腸壁增厚。主要以升結(jié)腸和橫結(jié)腸為主。顯微鏡下表現(xiàn)為整個結(jié)腸管壁浸潤有大量的T淋巴細胞、單核巨噬細胞,還有少量的中性粒細胞、嗜酸性粒細胞,尤其在黏膜層和黏膜下層最明顯,并有炎性肉芽腫形成。腸上皮有潰瘍形成,上皮細胞表面的黏液丟失,杯狀細胞消失,腺窩膿腫。腺體增生、延長、絨毛表面結(jié)構(gòu)變形和分叉樣改變。另外,個別動物的盲腸、回腸末端和胃也出現(xiàn)明顯的炎癥改變。脾臟和肝臟均不同程度增大,鏡下可見在肝臟的匯管區(qū)有明顯的淋巴細胞浸潤、部分肝細胞炎癥性壞死,在匯管區(qū)偶爾可發(fā)現(xiàn)少量的分葉核巨細胞。腸系膜淋巴結(jié)重現(xiàn),增大。
經(jīng)流式細胞儀分析,發(fā)現(xiàn)炎癥結(jié)腸黏膜固有層內(nèi)的CD4+T細胞表面表達相當高的 CD69[(72.5±12.5)%]和CD25[(32.5±8.5)%];腸黏膜組織內(nèi)CD4+T細胞IFN-γ、IL-2、TNF-α分泌量較對照組增加,而IL-4和IL-5分泌量無變化。
來源:中國實驗動物信息網(wǎng)
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